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检测原理

试剂盒组成

• 包被板：已包被抗小鼠 CSTA 抗体的微孔板，一般有 96 孔或 48 孔两种规格。
• 标准品：已知浓度的小鼠 CSTA 蛋白标准品，用于绘制标准曲线，通常有多个不同浓度梯度。
• 酶标工作液：含有标记了酶（如辣根过氧化物酶 HRP）的抗小鼠 CSTA 抗体的溶液。
• 底物溶液：如 TMB（四甲基联苯胺）等，可在酶的催化下发生显色反应。
• 终止液：用于终止显色反应，如硫酸溶液。
• 浓缩洗涤液：多为含表面活性剂的缓冲液，用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，使用时需稀释。
• 样本稀释液：用于将样本稀释至合适的浓度范围，以确保检测的准确性。

操作步骤

1. 准备试剂和样本：将试剂盒从冰箱取出，恢复至室温。按说明书要求稀释洗涤液、样本稀释液等。收集小鼠的血清、血浆、细胞培养上清等样本，并根据需要进行预处理，如离心去除杂质等。
2. 加样：将标准品和待测样本加入到相应的微孔中，同时设置空白对照孔。轻轻振荡混匀，在规定的温度（如 37℃）和时间（一般为 1 - 2 小时）下孵育。
3. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次，每次浸泡片刻后拍干，以去除未结合的抗原和抗体。
4. 加酶标工作液：向每孔加入适量酶标工作液，振荡混匀后，在规定条件下（如 37℃，1 - 2 小时）孵育。
5. 洗涤：重复洗涤步骤，以去除未结合的酶标抗体。
6. 显色：加入底物溶液，轻轻振荡混匀，在避光条件下孵育（如 37℃，15 - 30 分钟），使酶催化底物显色。
7. 终止反应：加入终止液，轻轻振荡混匀，终止显色反应。
8. 读数：使用酶标仪在特定波长下（如 450nm）测定各孔的吸光度值，根据标准曲线计算样本中 CSTA 的浓度。

注意事项

1. 严格按照试剂盒说明书的要求保存试剂盒，一般保存在 2 - 8℃，避免高温和阳光直射，不要使用过期试剂盒。
2. 实验操作过程中要保持移液器的准确性，加样要准确、快速，避免交叉污染，及时更换吸头。
3. 洗涤过程要 ，但不要过度洗涤，以免影响检测结果。洗涤液要使用新鲜配制的，并且用干净的容器和高质量的水。
4. 显色反应需在避光条件下进行，可将酶标板放在不透光的盒子或用铝箔纸包裹。底物溶液应在使用前新鲜配制，避免长时间放置。
5. 酶标仪的波长要准确设置，读数时间要按照说明书要求进行，以保证结果的准确性。在测定吸光度值前，要确保酶标板表面清洁，无残留液体和污渍。
6. 对于浓度过高或过低的样本，应进行适当的稀释或浓缩，稀释倍数要根据样本的预估浓度和试剂盒的检测范围合理选择，并在报告结果时注明。
7. 实验过程中要注意个人防护，避免试剂接触皮肤和眼睛，如不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医。同时，要妥善处理试剂盒中的废弃物，避免对环境造成污染。