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检测原理

试剂盒组成

• 预包被板：表面包被有抗小鼠 MAOA 抗体的微孔板。
• 标准品：一系列已知浓度的小鼠 MAOA 蛋白标准品，用于制作标准曲线。
• 生物素标记抗体：抗小鼠 MAOA 的生物素标记二抗。
• 亲和素 - HRP 结合物：含有亲和素和辣根过氧化物酶，用于催化底物显色。
• 底物溶液：通常为 TMB 等过氧化物酶底物，在 HRP 作用下会发生颜色变化。
• 洗涤缓冲液：多为含吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液（PBS - T），用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
• 终止液：一般为硫酸溶液，用于终止底物显色反应。
• 说明书：详细介绍试剂盒的使用方法、操作步骤、注意事项等。

操作步骤

1. 样本收集与处理：收集小鼠的血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清等样本。血清和血浆样本需离心去除杂质，组织匀浆需按规定方法制备并离心取上清，细胞培养上清直接收集。样本收集后若不能立即检测，需按要求保存于合适温度。
2. 准备试剂：将试剂盒从冷藏环境取出，平衡至室温。按说明书要求稀释生物素标记抗体、亲和素 - HRP 结合物等试剂。
3. 加样：将标准品和处理后的样本加入预包被板的微孔中，设复孔，加入规定体积的液体，轻轻振荡微孔板，在规定温度下孵育一定时间。
4. 洗涤：孵育结束后，倒掉微孔中的液体，用洗涤缓冲液洗涤微孔板，一般洗涤 3 - 5 次，每次浸泡一定时间，然后拍干或甩干微孔板。
5. 加二抗：向每个微孔中加入稀释好的生物素标记抗体，轻轻振荡混匀，在规定温度下孵育一段时间。
6. 洗涤：同步骤 4，再次用洗涤缓冲液洗涤微孔板。
7. 加亲和素 - HRP 结合物：加入稀释好的亲和素 - HRP 结合物，轻轻振荡，在规定温度下孵育适当时间。
8. 洗涤：重复步骤 4 的洗涤操作。
9. 显色：向每个微孔中加入底物溶液，轻轻振荡混匀，在避光条件下室温孵育一段时间，观察颜色变化。
10. 终止反应：当颜色变化达到合适程度时，向每孔加入终止液，轻轻振荡混匀，终止显色反应。
11. 读数：立即将微孔板放入酶标仪中，在规定的波长下测定各孔的吸光度值。
12. 结果计算：根据标准品的浓度和对应的吸光度值绘制标准曲线，然后根据样本的吸光度值从标准曲线上查得相应的浓度，即为样本中 MAOA 的含量。