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小鼠胶质细胞源性连接蛋白(GDN)酶联免疫试剂盒
  • 品牌：DUMABIO
  • 产地：上海
  • 型号：48/96T
  • 货号：DM-X6680
  • 价格： ￥1860/盒
  • 发布日期： 2025-04-18
  • 更新日期： 2025-04-18
产品详请
产地 上海
保存条件 2-8°
品牌 DUMABIO
货号 DM-X6680
用途 科研实验
检测方法
保质期 6个月
适应物种
检测限
数量 999
包装规格 48/96T
标记物
样本
应用
是否进口 否

小鼠胶质细胞源性连接蛋白(GDN)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断


产品货号：DM-X6680

产品规格：【48T/96T】

检测原理

  • 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被在微孔板上的抗体和检测相抗体都是针对 GDNF 的高纯度亲和纯化多克隆抗体，检测相抗体经生物素标记，随后加入过氧化物酶标记的亲和素进行反应，经过洗涤后用底物 TMB 显色。
  • TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的小鼠 GDNF 含量呈正相关，通过酶标仪在特定波长下测定吸光度值，从而计算出样品中 GDNF 的浓度1。

基本参数

  • 检测指标：GDNF。
  • 检测范围：不同试剂盒有所差异，如百奥莱博的试剂盒检测范围为 31.2pg/ml～2000pg/ml，emelcabio 的试剂盒检测范围为 31.25pg/ml～2000pg/ml。
  • 特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应。
  • 敏感性：如百奥莱博试剂盒敏感性＜2pg/ml，emelcabio 试剂盒敏感性为 12.1pg/ml。
  • 产品规格：常见的有 96T 等。

产品组成

  • 重组小鼠 GDNF 标准品：一般为冻干形式，如百奥莱博试剂盒中每管含 10ng，共 2 管，用于制作标准曲线。
  • 亲和素 - 过氧化物酶复合物（ABC）：如百奥莱博试剂盒中提供 100X 浓度的 ABC，100μL / 管。
  • 生物素标记抗体：与样品中的 GDNF 特异性结合。
  • 酶标板：通常为 96 孔单条可拆型酶标板，方便用户按需使用。
  • 洗涤缓冲液：用于洗涤酶标板，去除未结合的物质。
  • 底物 TMB：在酶的作用下发生颜色反应。
  • 终止液：用于终止酶促反应，使颜色稳定，便于读数。

样本要求

  • 可检测的样本类型包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
  • 每个标本量收集体积一般为 100μl× 检测种类。
  • 样品采集前应了解待检测成份的稳定性，对于需要周期收集的标本，应及时分装并在 - 20℃或 - 70℃条件下保存，避免反复冻融，标本在 2-8℃可保存 48 小时，-20℃可保存 1 个月，-70℃可保存 6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

操作步骤

  • 加样：将样品和标准品加入酶标板孔中，37℃反应 90 分钟，不洗。
  • 加生物素标记抗体：加入生物素标记的抗体，37℃反应 60 分钟，然后用 1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。
  • 加 ABC：加入亲和素 - 过氧化物酶复合物，37℃反应 30 分钟，再用 1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。
  • 显色：加入底物 TMB，37℃反应 15-20 分钟，此时溶液会出现蓝色。
  • 终止反应：加入终止液，蓝色立转黄色，用酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度（O.D.）值。


类型



试剂准备：从冰箱中取出试剂盒，室温平衡 30 分钟，确保所有试剂温度一致。同时，按照说明书要求配制所需的洗涤液、标准品稀释液等工作液。
样本准备：根据样本类型（血清、血浆、细胞培养上清等）和说明书要求进行处理，如血清样本需在采集后尽快离心分离，避免溶血。

仪器准备：准备好酶标仪、洗板机（可�。�、移液器、吸头、蒸馏水或去离子水等。


ELISA试剂盒操作步骤：
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。



结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。


注意事项
  1. 本试剂盒仅用于科研实验，严禁用于临床诊断、 或其他非科研用途。使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，熟悉操作步骤和注意事项。
  1. 实验过程中，应严格遵守实验室安全操作规程，穿戴好防护服、手套、护目镜等防护用品。试剂盒中的某些试剂可能具有毒性或腐蚀性，如酶标试剂、终止液等，操作时需特别小心，避免接触皮肤、眼睛和口腔。若不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医。
  1. 试剂盒从冰箱取出后，需在室温下充分平衡后再使用，避免因温度差异导致实验误差。不同批次的试剂盒可能存在一定差异，请勿混用不同批次的试剂盒组分，以免影响检测结果的准确性和重复性。
  1. 加样过程是实验的关键步骤之一，加样量的准确性和一致性直接影响检测结果。使用移液器时，需定期校准，确保移液体积准确无误。加样过程中，要避免产生气泡，若有气泡，应轻轻弹击微孔板使气泡逸出，以免影响反应结果。
  1. 洗涤过程对降低背景干扰、提高检测特异性至关重要。无论是使用洗板机还是手动洗涤，都要确保洗涤充分，每孔液体被完全去除。洗涤液应现用现配，避免使用过期或受污染的洗涤液。

试剂盒选择

· 评估性能指标：查看试剂盒的说明书，关注灵敏度、特异性、重复性等性能指标。灵敏度反映了试剂盒检测低浓度目标物的能力；特异性体现了试剂盒对目标物的识别准确性，避免与其他类似物质发生交叉反应；重复性则通过多次检测同一样本的结果一致性来评估。


上海笃玛生物科技有限公司

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