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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | -2.8℃ |
| 品牌 | DM |
| 货号 | 电询 |
| 用途 | 科研与实验 |
| 检测方法 | 吸附测定法 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | |
| 检测限 | |
| 数量 | 1000 |
| 包装规格 | 96T/48T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 血清,细胞,细胞上清液、体液等 |
| 应用 | 科研试剂 |
| 是否进口 | 否 |
牛促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒
一、 实验原理
是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人胰岛素受体α(INSRA)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胰岛素受体α(INSRA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
二、样本处理要求
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提�。崛“聪喙匚南捉校崛『笥】旖惺笛�。若不能人上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
三、竞争ELISA
此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：
① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
④ 用ELISA检测仪测定OD值。
被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外，试验中应用酶标抗原的量较多
四、ELISA试剂盒组成
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试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1个 |
1个 |
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酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
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标准品：36U/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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五、注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指�。裨蛴跋霴D值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 实验还需要酶标仪（450nm），37℃恒温箱，高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸馏水或去离子水。
11. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
12. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
13. 如果可能传播疾�。械难范加芾砗茫凑展娑ǖ某绦虼硌泛图觳庾爸�。
六、操作步骤
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1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本，37℃孵育90分钟 |
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2. 弃掉板内液体后，立即加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 |
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3. 弃掉板内液体，洗板3次 |
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4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 |
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5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右 |
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6. 每孔加入50μL终止液 |
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7. 立即在450nm波长下读数，处理数据 |
七、实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗�：途酆衔�。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。
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