兔细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒-上海笃玛生物科技有限公司

您当前的位置：网站首页 > 产品展厅 >ELISA试剂盒 >兔ELISA试剂盒 >兔细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒

产品展厅

兔细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒

起订量 (盒)价格

1-2￥1896 /盒

≥2￥1680 /盒

品牌：DUMABIO

产地：上海

型号：96T/48T

货号：电询

发布日期： 2024-01-09
更新日期： 2024-10-09

发送咨询信息

产品详请

产地	上海
保存条件	2-8℃
品牌	DUMABIO
货号	电询
用途	科研与实验
检测方法	吸附测定法
保质期	6个月
适应物种	兔子
检测限	兔子
数量	1000
包装规格	96T/48T
标记物	无
样本	血清，细胞，细胞上清液、体液等
应用	科研试剂
是否进口	否

兔细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒

酶免疫试验是一种利用酶作为标记物的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，被广泛应用于医学、生物学等领域。然而，酶免疫试验的结果受到多种因素的影响，下面将就几个主要因素进行探讨。

一、抗原与抗体的质量

抗原与抗体的质量是影响酶免疫试验结果的重要因素之一。抗原与抗体是酶免疫试验中的关键试剂，其质量直接关系到试验的灵敏度和特异性。高质量的抗原应该具有高纯度、高免疫原性、良好的稳定性等特点，以保证抗体的高效产生。同时，抗体的选择也十分关键，应该选择特异性强的抗体，避免交叉反应和假阳性结果的出现。

二、酶标记物的活性

酶标记物的活性是影响酶免疫试验结果的重要因素之一。酶标记物是酶免疫试验中的关键成分，其活性直接关系到试验的灵敏度和准确性。因此，在酶免疫试验中，要保证酶标记物的活性，并定期监测其活性，以确保试验结果的准确性。

三、样本处理与保存

样本处理与保存也是影响酶免疫试验结果的重要因素之一。不同的样本处理方法可能会影响试验结果，因此需要制定标准的样本处理流程，并严格按照流程操作。同时，样本的保存条件也会影响试验结果，特别是对于一些不稳定成分的样本，需要采取适当的保存措施，以保证其有效性。

兔细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒

四、实验操作与仪器设备

实验操作与仪器设备也是影响酶免疫试验结果的重要因素之一。实验操作人员的技能水平和经验直接影响着试验结果的准确性和可靠性。因此，进行酶免疫试验时，需要严格遵守操作规程，确保操作的准确性和一致性。同时，仪器设备的精度和稳定性也十分重要，需要定期进行校准和维护，以保证试验结果的准确性。

五、温度与时间控制

温度与时间控制也是影响酶免疫试验结果的重要因素之一。在酶免疫试验中，温度和时间的控制对于保证试验结果的准确性和稳定性至关重要。不同的温度和时间条件可能会影响抗原与抗体的结合和酶标记物的活性，因此需要严格控制实验条件，并进行充分的优化和验证。

六、试剂质量与浓度

试剂质量与浓度也是影响酶免疫试验结果的重要因素之一。在酶免疫试验中，各种试剂的浓度和质量都会对试验结果产生影响。因此，需要选择质量可靠的试剂，并进行质量检查和控制。同时，需要根据实验要求对试剂浓度进行优化和调整，以保证试验结果的准确性和可靠性。

综上所述，影响酶免疫试验的主要因素包括抗原与抗体的质量、酶标记物的活性、样本处理与保存、实验操作与仪器设备、温度与时间控制以及试剂质量与浓度。为了获得准确可靠的试验结果，需要充分考虑这些因素并采取相应的措施进行控制和优化。同时，进行酶免疫试验时需要严格遵守操作规程，并保证实验的标准化和规范化。

辣根过氧化物酶
过氧化物酶（HRP）广泛分布于植物中，辣根中含量，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的吸收光谱分别为275nm和403nm。
酶的纯度以RZ表示：RZ=OD403/OD275
纯酶的RZ多在3.0以上，为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶，非酶蛋白约占 75%，不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢，催化反应时的供氢体有几种：⑴邻苯二胺（OPD），产物为橙色，可溶性，敏感性高，吸收值在490nm，可用肉眼观察判别，容易被浓硫酸终止反应，颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA中最常用的一种；⑵联大茴香胺（OD），产物为橘黄色，吸收值在400nm，颜色较稳定；⑶5－氨基水杨酸(5－AS）：产物为深棕色，吸收值在449nm，部分溶解，敏感性较差；⑷邻联甲苯胺（OT）产物为蓝色，吸收值在630nm，部分溶解，不稳定，不耐酸，但反应快，颜色明显。
碱性磷酸酶
系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提�。啥喔鐾γ缸槌�。它们的底物种类很多，常用者为硝基苯磷酸盐，廉价无毒性。酶解产物呈黄色，可溶，吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反应系统中，37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。
标记方法
良好的酶结合物取决于两个条件：即高效价的抗体和高活性的酶。抗体的活性和纯度对制备标记抗体至关重要，因为特异性免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。在酶标记过程中，抗体的活性有所降低，故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白，使用亲和层析提纯的抗体，可提高敏感性，而且可稀释使用，减少非特异性吸附。
酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟，取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5g纯化抗体的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加硼氢化钠（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即得到酶标抗体，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。
效果测定
测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
⑴ 酶与抗体的活性常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以ELISA方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。
⑵ 结合物的定量测定一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：
酶量（mg/ml）=OD403×0.42
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62
已知酶量和IgG量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。
HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4
结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×
用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时。
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。

彩神vll官网-追求健康,你我一起成长