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    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒
    • 品牌：DM
    • 产地：上海
    • 型号：96T/48T
    • 货号：DM-P5443
    • 价格： ￥1896/盒
    • 发布日期： 2023-12-15
    • 更新日期： 2024-10-09
    产品详请
    产地 上海
    保存条件 ?2.8℃
    品牌 DM
    货号 DM-P5443
    用途
    检测方法 吸附测定法
    保质期 6个月
    适应物种 猪
    检测限 猪
    数量 1000
    包装规格 96T/48T
    标记物 电询
    样本 ?血清,细胞,细胞上清液、体液等
    应用 科研试剂
    是否进口 否

    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒
    竞争法测抗原

    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒


    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒

    首先将特异性抗体包被于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,另一组只加酶标记抗原,经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可,对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。优点是快,缺点是需要较多量的酶标记抗原。
    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒

    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒


    间接ELISA
    本法主要用于检测抗体。以鸭�。―VH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。
    ⑴ 材料
    ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；
    ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；
    ③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。
    ⑵ 方法步骤
    ① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
    ② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
    ③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
    ④ 加底物液 → 37℃ 30分钟，加终止液
    ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。
    ⑶ 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。
    双抗体夹心
    本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。
    ① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
    ② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
    ③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
    ④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加终止液
    ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。
    双夹心ELISA
    此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：
    ① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
    ② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
    ③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
    ④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
    ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
    ⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。


    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒

    ELISA的样本实验准备
    在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的, -71℃冻存备用。标本
    2. 血浆:
    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    3. 尿液:
    用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
    4. 细胞培养上清:
    检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
    5. 培养细胞
    检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    6. 组织标本
    切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒


    90分钟一步法ELISA试剂盒:
    1.高效,灵敏,特异的抗体
    2.稳定的重复性和可靠性
    3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高和固相载体
    4.适用血清,血浆,组织匀浆液,细胞培养上清液,尿液等多种标本型


    猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联免疫试剂盒
    操作步骤
    实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
    1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
    为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
    2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
    3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
    4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
    5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
    6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
    7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
    8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
    注:
    1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
    2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是 加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
    3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
    4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
    5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    洗板方法
    手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
    自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
    计算
    以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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